Techniques de biologie moléculaire

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Principales techniques utilisées couramment en biologie moléculaire :

Sommaire 1 Électrophorèse 2 Manipulation d'ADN et d'ARN 2.1 Extraction 2.2 Amplification 2.3 Séquençage 2.4 Quantification 2.5 Autres 3 Manipulation de protéines

[modifier] Électrophorèse

• Électrophorèse sur gel : cette technique permet de séparer des molécules en fonction de leur taille (appelée poids moléculaire) en les faisant migrer à travers un gel par application d'un champ électrique. Cette technique peut être utilisée pour séparer de l'ADN, de l'ARN (gels d'agarose ou d'acrylamide) ou des protéines (gel d'acrylamide)
• DGGE : Denaturing Gradient Gel Electrophoresis
• Électrophorèse capillaire : Variante d'électrophorèse utilisée pour le séquençage de l'ADN.

[modifier] Manipulation d'ADN et d'ARN

[modifier] Extraction

• Digestion enzymatique (restriction digest) : technique utilisant des enzymes de restriction pour couper spécifiquement une molécule d'ADN afin de la manipuler ou de la cloner.

• Minipréparation ou miniprep : technique permettant d'extraire de bactéries transformées une petite quantité d'ADN plasmidique.

En fonction de la quantité d'ADN souhaité des midipréparations ou des maxipréparations sont également utilisées.

• Clonage : technique qui consiste à isoler un fragment d'ADN et à le multiplier à l'identique en l'« insérant » dans une molécule d'ADN « porteuse » appelée vecteur permettant son amplification.

[modifier] Amplification

• PCR : (Polymerase chain Reaction) cette technique est utilisée pour amplifier de l'ADN, c'est à dire obtenir une grande quantité de copies d'une séquence nucléotidique donnée.

• RT-PCR : technique dérivée de la PCR et permettant de cloner un gène ou de quantifier son taux de transcription (quantité d'ARN présente).

• RAPD : technique d'amplification aléatoire permettant de comparer des ADN génomiques.

[modifier] Séquençage

• Séquençage de l'ADN : technique permettant de définir l'ordre des nucléotides d'un fragment d'ADN plasmidique ou génomique.

[modifier] Quantification

• Southern blotting : technique utilisant l'électrophorèse sur gel et permettant de détecter des séquences d'ADN particulières. Utilisé fréquemment en biologie moléculaire pour détecter le nombre de copies de transgènes insérés dans le génome d'une cellule ou d'un organisme génétiquement modifié.

• Northern blotting : technique dérivée du Southern blotting utilisée pour détecter et quantifier un type d'ARN donné.

[modifier] Autres

• Le marquage des acides nucléiques.
• Transformation génétique ou transgenèse : technique consistant à introduire un ou plusieurs gènes dans des cellules (par exemple végétales, animales, bactériennes) menant à la transmission du gène introduit, ou transgène, aux générations successives.
• Le polymorphisme de longueur des fragments de restriction (ou RFLP) : technique d'étude du polymorphisme génétique, à la base des "empreintes génétiques" et du "ribotypage".

[modifier] Manipulation de protéines

• Western blotting : technique dérivée du Southern blotting utilisée pour détecter et quantifier un type de proteine donné.

• Séquençage des protéines: technique permettant de définir l'ordre des acides aminés d'une séquence polypeptidique.

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