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La technique de Southern blot est une méthode de biologie moléculaire. La méthode a été baptisée du nom de son inventeur, le biologiste britannique Edward Southern, et ceci a permis de développer d'autres méthodes de blot (par exemple, Western blot, Northern blot).
- Le gel d'électrophorèse est trempé dans une solution alcaline (contenant typiquement de l'hydroxyde de sodium) afin de permettre la dénaturation de l'ADN bicaténaire (séparation de l'ADN double-brin en simple-brin).
- Une feuille de membrane de nitrocellulose (ou, alternativement, de nylon) est placée sur le gel. Une pression est appliquée au gel en plaçant une pile de serviettes de papier et par un poids sur la membrane et le gel, par exemple. Ceci va permettre le déplacement de l'ADN contenu dans le gel sur la membrane, où il va se fixer.
- La membrane est alors chauffée, dans le cas de nitrocellulose, ou exposée au rayonnement ultra-violet si c'est du nylon, et ce, afin de fixer de manière permanente l'ADN sur la membrane.
- La membrane est ensuite mise en contact avec une sonde spécifique de la séquence d'ADN recherchée. La sonde est marquée de sorte qu'elle puisse être détectée, habituellement en incorporant de la radioactivité ou en "étiquetant" la molécule avec un fluorophore. Dans certains cas, la sonde peut être faite à partir d'ARN, plutôt que d'ADN.
- Après hybridation, la sonde en excès est éliminée de la membrane par différents lavages, et l'hybridation est visualisée sur un film autoradiographique, dans le cas d'une sonde radioactive ou fluorescente.
La sonde va réveler la position sur la membrane des fragments d'ADN recherchés.
Vous avez de 
