Marquage des acides nucléiques
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Vous avez de Il existe deux principales méthodes de marquage des acides nucléiques. Soit en utilisant des précurseurs radioactifs soit en utilisant des précurseurs fluorescent. Ces précurseurs s'incorporent dans l' ADN et par leurs propriétés il est aisé de les révéler.
[modifier] Le marquage in vivo
In vivo, on met les cellules en contact avec un précurseur radioactif. Pour marquer spécifiquement l'ADN, on utilise un précurseur avec de la thymidine. La thymidine n'existe pas dans l'ARN. Ce précurseur (Tdr) est phosphoré pour donner de la thymidine monophosphate (TMP). Dans la cellule, la machinerie continue la phosphorylation pour former de la thymidine diphosphate puis triphosphate car c'est ce dernier qui est incorporé dans l'ADN. Pour marquer la thymidine les biologiste utilise le tritium qui prend la place d'un hydrogène. Cette molécule est donc marquée dans l'ADN rendu radioactif.
Pour marquer l'ARN, on utilise l'uridine. L' uridine peut être également marqué au tritium. Pour marquer l'ADN et l'ARN en même temps, il est possible d'utiliser le phosphate radioactif. Il suffit de mettre dans le milieu du 32PO43-. Il pénètre dans la cellule et est incorporé sur les différents précurseurs. Cette méthode a pour avantage de ne marquer que les acide nucléiques en cours de synthèse.
[modifier] In vitro
In vitro, il est possible de marquer l'ADN dans sa masse. C’est-à-dire que l'on peut insérer des atomes radioactifs soit dans sa longueur, soit aux extrémités. On peut également utiliser des marqueurs fluorescents.
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