革蘭氏染色
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革蘭氏染色是用來鑑辨細菌的一種方法，細菌細胞壁上的主要成份不同，利用這種染色法，可將細菌分成兩大類。這種染色法是由一位丹麥醫生漢斯·克裡斯蒂安·革蘭(1853年-1938年)於1884年所發明，最初是用來鑑別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關係。
革蘭氏染色的对象是细菌的细胞壁。染色后的细菌可在显微镜下更好的观察，以便于区分。
该染色法是以丹麦医生和细菌学家汉斯·克里斯蒂安·格兰（Hans Christian Gram）的名字命名的，他在19世纪末发展出这一方法。
不同的细菌在该染色法的作用底下反应不同，借以区分成为两类：
- 格兰氏阳性细菌, 胞壁染色后呈蓝紫色
- 格兰氏阴性细菌, 染色后呈红色。
这是辨别细菌种类的一个重要特性，对由细菌感染引起的疾病的临床诊断及治疗很有帮助。
"格兰氏阳性"细菌和"格兰氏阴性"细菌对抗生素的反应并不一样。通过抽取样品医生可以在很短的时间内（5分钟左右）确定细菌的格兰氏性质。这样，医生就可以迅速的给病人注射抗生素，而不需要等待通过细菌培植得到的化验结果，这往往需要几天时间。
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[编辑] 染色流程
流程可概括為：染色-脱色-複染。
第一步初染劑（Primary Stain）： 使用结晶紫染色。
第二步媒染劑（Mordant）： 加入複方碘溶液或稱革蘭氏碘液（Gram's Iodine）後會形成不溶性的結晶紫-碘（CV-I）複合体。細菌呈紫黑色。第二步是關键，它的目的是分辨细菌的革蘭氏染色特性。若為革蘭氏陽性菌，此複合體係結合於細胞壁之鎂、核糖核酸組成（Magnesium Ribonucletic Acid），形成鎂-核糖核酸-結晶紫-碘（Mg-RNA-CV-I）複合體，不易脫去。
第三步脫色劑（Decoloring Agent）： 使用酒精（95%）脱色，試劑具脂溶劑（Lipid Solvent）和蛋白脫水劑（Protein Dehydrating Agent）之雙重功能。此步驟對革蘭氏陽性細菌無效，因為細胞壁上厚厚的細胞壁層阻隔了結晶紫-碘複合體的外渗，只能留在细菌体内。革蘭氏陰性菌細胞壁層薄，會被脱色而成為無色。
第四步複染劑（Counterstain）： 為了對比，在此之後会加入番红（Safranin）進行複染，革蘭氏陰性菌成红色，而革蘭氏陽性菌仍保有原來的紫色。
[编辑] 定性
[编辑] KOH-试验
另外的一种方法是 氢氧化鉀-试验。将培养好的细菌取出一小部分，使其悬浮于一滴KOH溶液中。格兰氏阳性菌与之不发生反应，用细针穿过该溶液，溶液呈正常液体状。格兰氏阴性菌胞壁太薄，无法抵抗碱液的侵蚀。细菌体被破坏，DNA溢出，溶液粘性上升。用细针穿过溶液，可以看到溶液中布有丝状物质。
[编辑] 氨肽酶试验
除了个别例外，只有格兰氏阴性菌才能证明氨肽酶的存在。这是该试验的基础。 将要进行试验的细菌放入试管加水。放入一张显示肽酶活性的试纸，在37°C下等待10到35分钟，试纸变成深黄色。
[编辑] 實驗方法
[编辑] 藥品
- 結晶紫:作為初染劑
- 碘液:作為媒染劑
- 酒精:濃度為95%，作為脫色劑
- 番紅:複染劑
[编辑] 實驗器材
實驗菌種、接種環、蒸餾水、玻片、酒精燈、吸水紙、顯微鏡
[编辑] 實驗步驟
- 將菌種抹於玻片上，並置於酒精燈上加以熱固定。
- 將結晶紫滴於玻片上，靜置一分鐘後用蒸餾水洗去多餘的結晶紫。
- 將碘液滴於玻片上，靜置一分鐘後，用蒸餾水洗去多餘的碘液。
- 酒精脫色，直至無結晶紫的顏色流出為止。
- 以番紅複染，約45秒後用蒸餾水洗去。
- 用洗水紙將多餘的水吸乾後，即可置於顯微鏡下觀察。
注意事項：
- 以酒精燈烘乾玻片時，應避免熱源持續對同一點加熱，以免玻片破掉。
- 以蒸餾水洗去多餘藥品時，應避免直接沖洗到樣品的位置，可將玻片與水平面呈一個角度，使蒸餾水由玻片較高處往樣品處流去。
- 此實驗的標準作法應於無菌的狀態下操作。
- 本實驗可以大腸桿菌和金黃葡萄球菌作為控制組。
[编辑] 實驗結果
- 革蘭氏陽性菌呈現紫色，或更深的藍黑色。
- 革蘭氏陰性菌呈現粉紅色或紅色。
