Hybridation de l'ADN

Un article de Wikipédia, l'encyclopédie libre.

Vous avez de nouveaux messages (diff^?).

Cet article est une ébauche à compléter concernant la biologie, vous pouvez partager vos connaissances en le modifiant.

L'hybridation de l’ADN est une technique de génie génétique. C’est une technique particulière d’hybridation moléculaire qui permet de déterminer la ressemblance entre les séquences de deux brins d’ADN que l’on veut comparer.

Elle est employée par exemple sur l’ADN d’un gène homologue (cytochrome b, etc.) ou sur l’ADN mitochondrial prélevé chez des individus, d’au moins trois espèces, dont on veut connaître le degré de parenté.

Sommaire

1 Principes
2 Applications
- 2.1 Classification des oiseaux de Sibley et Monroe
- 2.2 Place d’Homo neanderthalensis et d’Homo sapiens

[modifier] Principes

Les deux chaînes d’une molécule d’ADN sont complémentaires selon la règle de Chargaff, des liaisons de faible énergie (liaison hydrogène) s’établissant entre leurs bases azotéés.

[modifier] Dénaturation de l'ADN

Dans un premier temps, il faut dénaturer les différentes molécules d’ADN. Un chauffage entre 50°C et 80°C provoque la rupture des liaisons hydrogène et donc la séparation des deux chaînes complémentaires.

[modifier] Formation d’un hétéroduplex

Ensuite deux brins monocaténaires issus de 2 ADN différents sont mis en contact, en présence d’enzymes spécifiques (ADN polymérase). La molécule bicaténaire obtenue (hétéroduplex) possède une plus ou moins grande proportion de bases complémentaires qui établissent entre elles, de nouvelles liaisons hydrogène.

[modifier] Dénaturation des hétéroduplex

Dans un dernier temps, les différents hétéroduplex sont chauffés. La température à laquelle 50 % des liaisons hydrogène sont rompues est mesurée et comparée à celle de la molécule naturelle (ADN témoin). Il y a proportionnalité entre cette température et le nombre des liaisons établies lors de l’hybridation.

Plus la température de dénaturation est élevée (proche de celle de la molécule d’ADN témoin), plus la similarité entre bases complémentaires est grande et donc les espèces proches.