Polymeraasiketjureaktio

Wikipedia

Polymeraasiketjureaktio eli PCR on geenitekniikan menetelmä, jolla yksittäinen geeni voidaan monistaa eksponentiaalisesti. PCR suoritetaan elävien solujen ulkopuolella laboratoriossa, in vitro.

PCR-tekniikkaa käytetään moniin tarkoituksiin, muun muassa perinnöllisten sairauksien etsimiseen, geeneettisten sormenjälkien tunnistamiseen, infektiosairauksien diagnostisointiin, geenien kloonaamiseen, isyystestaukseen ja DNA-tietokoneissa.

PCR:n avulla hyvin pienestä DNA-määrästä saadaan muutamassa tunnissa monistettua miljardikertainen määrä samaa DNA:ta. Näin edellä kuvattujen asioiden tutkiminen helpottuu valtavasti.

PCR-tekniikan keksi Kary Mullis 1983. Hän sai työstään Nobelin kemianpalkinnon 1993.

[muokkaa] Yhden PCR-syklin kulku

Kuvan yläosassa sinisenä alkuperäinen, monistettava DNA. Vaihe 1: DNA:n denaturointi (94-96 °C), DNA:n säieparit irtoavat toisistaan. Vaihe 2:Alukeiden (primer) kiinnittyminen (68 °C). Vaihe 3: Pidentyminen (72°C). P=Polymeraasientsyymi. Kohta 4: Ensimmäinen sykli on valmis. Kuvassa yhteensä kolme sykliä. Jokainen sykli kaksinkertaistaa DNA:n määrän.

1. Syklin aluksi suoritetaan denaturaatiovaihe, jolloin reaktioseos kuumennetaan 94-96°C, jolloin DNA:n juosteet irtoavat toisistaan.
2. Tämän jälkeen lämpötilaa lasketaan. Tutkittavalle DNA-kohdalle spesifiset alukkeet (primers) kiinnittyvät yksisäikeiseen DNA:han.
3. Seuraavaksi tapahtuu vastinsäikeen luominen (extension). DNA-polymeraasi aloittaa primerista alkaen vastinparin luomisen yksisäikeiselle DNA:lle.

Näitä syklejä toistetaan useita, yleensä 25-45 kappaletta ^[1] ja DNA:n määrä kaksinkertaistuu jokaisessa syklissä.

[muokkaa] Lähteet

1. ↑ http://www.edu.fi/oph/abc/dna/pcr.html

Tämä lääketieteeseen liittyvä artikkeli on tynkä. Voit auttaa Wikipediaa laajentamalla artikkelia.